PCR儀溫度校準說明
瀏覽次數(shù)：3324發(fā)布日期：2020-09-22
PCR儀溫度校準說明
PCR儀溫度校準是一種用來放大特定的DNA時間段的儀器，主要采用的是半導體熱泵制冷技術(shù)以及膜加熱技術(shù)，保證了升溫速度的穩(wěn)定和快速。
PCR技術(shù)能快速地在體外試管內(nèi)擴增目標基因或DNA時間段,是科研人員獲得目標DN時間片段的常用技術(shù),在生物醫(yī)學領(lǐng)域得到廣泛的應用。PCR儀樣品塊的溫度精度和均勻性是影響PCR反應效果的重要因素。為了測量樣品塊的溫度均勻性及其它溫度參數(shù),要求測量工具必須具有多個測量通道,且具有很佳的測量精度、響應速度、通道一致性和通道同步性。
關(guān)于PCR儀溫度校準的詳細說明：
（一）溫度準確性
溫度準確性是PCR儀重要的性能指標，如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增，甚錯誤的擴增結(jié)果，造成假陽性和假陰性。
市場上各家廠商考核基因擴增儀（PCR儀）性能的主要指標，一般廠家的企業(yè)指標為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實現(xiàn)的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進行測試。
校準實驗平均溫度的計算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數(shù)量
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由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。
校準實驗時，通過選取孔板中16個特殊反應位置來測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時刻大溫度與小溫度的差值。均勻度計算公式為：tmax-tmin（tmax =大溫度；tmin =小溫度）
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PCR擴增產(chǎn)物數(shù)量的多少決定了PCR的效率。為了在短時間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力（大升溫速率達15~20℃）。一個完整的PCR過程，是由若干個升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因為“變性”，“退火”和“延伸”3個階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過程盡可能地迅速，才能縮短每個PCR循環(huán)以及整個PCR 過程所需時間。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。
PCR儀溫度校準實驗中，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時間。
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